Постійний препарат фарбування за Feulgen без використання монтажного середовища
DOI:
https://doi.org/10.32782/2415-8127.2022.66.31Ключові слова:
фарбування за Feulgen, постійні препарати, без монтажного середовища.Анотація
Вступ. Фарбування за Фельгеном використовується в медичних і біологічних дослідженнях, коли необхідно оцінити рівень ДНК і її локалізацію в клітинах. Деякі фіксатори, монтажні середовища та світло можуть знизити якість препаратів для мікроскопії, впливаючи на барвник. Мета дослідження. Наше дослідження мало на меті і) розробити модифікацію процедури Feulgen, яка виключала б використан- ня жорстких фіксуючих засобів і монтажних середовищ та іі) оцінити візуально ефект на якість препаратів, забарвлених за Feulgen, періодичного освітлення під час навчального процесу протягом 6 років. Матеріали та методи. Щоб уникнути проблеми погіршення пофарбованих зразків, ми не використовували сильні фіксатори та монтажні середовища, а також уникали тривалої експозиції світла на мікроскопічні препарати. Для виготовлення постійних мікро- скопічних препаратів, пофарбований зразок, покритий накривним склом, добре висушували на повітрі, а потім заклеювали скотчем по периметру покривного скла замість використання монтажного середовища. Препарати зберігалися загорнутими в чорний папір і використовувалися для навчання студентів медичного та біологічного факультетів протягом близько 20 годин щороку протягом 6 років. Мікрофотографії однієї і тієї ж ділянки тканини, зроблені на початку та в кінці цього періоду, порівнювали за якістю візуально. Результати і обговорення. Висушування пофарбованих зразків без монтажного середовища між покривним і предметним скельцями на повітрі з наступним їх заклеюванням скотчем забезпечувало якісні препарати. Їх використання для навчання студентів про- тягом 6 років близько 20 годин щороку не викликало візуально помітних погіршень через вицвітання або інші зміни пофарбованої тканини. Про це свідчить порівняння мікрофотографій, зроблених на початку та в кінці цього періоду. Висновок. Запропонований варіант методу забарвлення за Feulgen може бути застосований для навчання студентів медицині та біології та, можливо, для рутинних аналізів.
Посилання
Agarwal N, Biancardi AM, Patten FW, Reeves AP, Seibel EJ Three-dimensional DNA image cytometry by optical projection tomographic microscopy for early cancer diagnosis. Journal of Medical Imaging. 2014; 1(1): 017501-1 – 017501-10.
Chieco P, Derenzini M. The Feulgen reaction 75 years on. Hoppe-Seyler’s Zeitschrift fur physiologische Chemie. 1999; 111(5): 345-358.
Danielsen HE (med.ed) DNA ploidy investigation aided by image cytometry. Oslo University Hospital, 2018. Available from: http://oncolex.org/Prosedyrer/DIAGNOSTICS/Gyn_DNAPloidy?lg=print
Dewse CD, Potter CG. Influence of light and mounting medium on the fading of Feulgen stain. Stain Technology. 1975; 50(5): 301-306. 5. Feulgen R, Rossenbeck H. Mikroskopisch-chemischer Nachweis einer Nukleinsäure vom Typus der Thymonukleinsäure und die darauf beruhende elektive Färbung von Zellkernen in mikroskopischen Präparaten. Hoppe-Seyler’s Zeitschrift fur physiologische Chemie. 1924; 135: 203-248.
Gill GW.; Mounting media. In: Cytopreparation. Essentials in Cytopathology. 2013 (12): 259-278. New York: Springer; 2013. Available from: https://doi.org/10.1007/978-1-4614-4933-1_16
Greilhuber J, Temsch EM. Feulgen densitometry: some observations relevant to best practice in quantitative nuclear DNA content determination. Acta Botanica Croatia. 2001; 60(2): 285-298.
Haroske G, Baak JP, Danielsen H, Giroud F, Gschwendtner A, Oberholzer M, Reith A, Spieler P, Bocking A. Fourth updated ESACP consensus report on diagnostic DNA image cytometry. Anal Cell Pathol. 2001 23(2):89-95.
Hillary BB. Use of the Feulgen Reaction in Cytology I. Effect of fixatives on the reaction. Botanical Gazette. 1939; 101(2): 276–300.
Kasten FH. Robert Feulgen and his histochemical reaction for DNA. Biotechnic & Histochemistry. Biological Stain Commission. 2003;78(1): 45-49.
Kayser K, Blum S, Beyer M., Haroske G., Kunze KD, Meyer W. Routine DNA cytometry of benign and malignant pleural effusions by means of the remote quantitation server Euroquant: a prospective study. Journal of Clinical Pathology. 2000;53: 760–764.
Lyon HO, Schulte EK., Prento P, Barer MR., Béné MC. Standardized staining methods: Feulgen-Rossenbeck reaction for desoxyribonucleic acid and periodic acid-Schiff (PAS) procedure. Biotechnic and Histochemistry, 2002; 77(3): 121-125.
Mello M-LS., Vidal BC. The Feulgen reaction: A brief review and new perspectives. Acta Histochemica. 2017; 119(6): 603-609.
O’Neil MJ, Smith A., Heckelman PE (eds.). The Merck Index – An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals. Whitehouse Station, NJ: Merck & Co., Inc.; 1996.
Salih MM, Elsheikh LA Feulgen Reaction as a marker for identifying prostatic hyperplasia and prostate cancer. Andrology.
Schulte EK. Standardization of the Feulgen reaction for absorption DNA image cytometry: a review. Analytical Cellular Pathology. 1991; 3 (3): 167-182.
Schulte EKW, Seigneuring D, Giroud F, Brugal G. DNA densitometry. pp. 140-169. In: Hamilton PW, Allen DC (eds.). Quantitative Clinical Pathology. Oxford: Blackwell Science, 1995.
Shackney SE, Burholt DR, Pollice AA, Smith CA, Pugh RP, Hartsock J Discrepancies between flow cytometric and cytogenetic studies in the detection of aneuploidy in human solid tumors. Cytometry. 1990; 11: 94-104.
Swartz FJ, Nagy ER Feulgen stain stability in relation to three mounting media and exposure to light. Stain Technology. 1963; (38)3: 179-185.
Tribukait B, Granberg-Öhmann I, Wijkström H. Flow cytometric DNA and cytogenetic studies in human tumors: a comparison and discussion of the differences in modal values obtained by the two methods. Cytometry. 1986; 7: 194-199.
